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篩選獲得草珊瑚與金粟蘭鑒別的特異位點并建立雙位點特異性PCR方法,用于鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片以及兩者的混雜品。采集不同產地的草珊瑚18份、金粟蘭6份,所有樣品提取總DNA,并對草珊瑚與金粟蘭干燥葉片進行DNA提取。通過對其ITS片段進行擴增、測序,并搜索GenBank數據庫中收錄的草珊瑚與金粟蘭的ITS序列,進行同源比對后根據其變異位點設計特異性鑒別引物,構建多重PCR體系,并優(yōu)化PCR條件,對草珊瑚與金粟蘭葉片進行快速分子鑒定。構建了多重PCR鑒別體系,只經一個PCR反應,能擴增出草珊瑚580 bp的特異性鑒別條帶及金粟蘭470 bp的特異性片段,可快速鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片,并可判斷相互是否混雜。使用雙位點特異性PCR技術可以有效快速鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片,并可判斷相互是否混雜。
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