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更新時(shí)間：2025.01.04
結(jié)縷草屬植物ISSR-PCR反應(yīng)體系研究

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頁數(shù)： 4頁

以SDS法提取的結(jié)縷草(Zoysia spp.)葉片DNA為模板,應(yīng)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),從Mg2+、dNTP、引物和DNA聚合酶并通過比較不同濃度的模板DNA對PCR擴(kuò)增的影響,確立結(jié)縷草屬植物ISSR-PCR反應(yīng)的最佳體系。結(jié)果表明:各因素不同濃度對PCR反應(yīng)結(jié)果有顯著影響,正交設(shè)計(jì)可以用于ISSR反應(yīng)體系建立,該方法建立的結(jié)縷草屬植物ISSR-PCR優(yōu)化反應(yīng)體系為10X Buffer7、0 ng模板DNA、Mg2+2.0 mmol.L-1、dNTP 150μmol.L-1、Primer 0.3μmol.L-1、Taq DNA聚合酶1.0 U,總體積20μL;經(jīng)對11份結(jié)縷草屬植物進(jìn)行檢驗(yàn),證明該體系穩(wěn)定可靠。該體系的建立可為今后利用ISSR標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行結(jié)縷草屬遺傳多樣性研究、種質(zhì)資源鑒定和親緣關(guān)系分析等提供依據(jù)。

結(jié)縷草屬植物SRAP-PCR體系的建立和優(yōu)化

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頁數(shù)： 9頁

以SDS法提取的結(jié)縷草屬植物葉片DNA為模板,分別采用單因子試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)2種方法,對影響結(jié)縷草屬植物SRAP-PCR的Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶和模板DNA五個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)。單因子試驗(yàn)分別研究各因素在多水平條件下對SRAP-PCR反應(yīng)體系的影響,得到最佳反應(yīng)條件。正交設(shè)計(jì)采用L16(45)方案,綜合考慮各因素間的相互作用,通過直觀分析法獲得各影響因素的最佳反應(yīng)水平。根據(jù)4對引物對6份結(jié)縷草屬植物材料擴(kuò)增結(jié)果的驗(yàn)證比較,2種方法所獲得的最佳反應(yīng)體系存在一定的差異。通過綜合比較和分析2種方法的優(yōu)化體系擴(kuò)增出的條帶數(shù)、多態(tài)性條帶數(shù)及多態(tài)性比率,最終建立了結(jié)縷草屬植物SRAP-PCR的最佳反應(yīng)體系:Mg2+2.00 mmol/L、dNTP 220μmol/L、引物0.20μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 60 ng、2μL 10×buffer,總體積為20μL。這一優(yōu)化體系的建立為今后利用SRAP標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行結(jié)縷草屬植物遺傳多樣性、種質(zhì)鑒定、遺傳連鎖圖譜及親緣關(guān)系分析等方面的研究提供了科學(xué)的依據(jù)。

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